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- 該緩沖液主要是提供合適酸堿度的連接體系,如10mMMgCl2作用是激活酶反應；1-20mM的DTT(最常用的是10mM),作用是維持還原性環(huán)境,穩(wěn)定酶活性,25-50μg/mL的BSA,作用是增加蛋白質的濃度,防止因蛋白濃度過稀而造成酶的失活,與限制酶緩沖液不同的是連接酶緩沖液中還有0.5-4mMATP(三磷酸腺苷),現(xiàn)多用濃度是1mM,是酶反應所必須的。 連接緩沖液的pH也很重要,一般將緩沖液的pH調到7.4-7.8,較多用7.8,實驗表明如把pH定為7.5-8.0,酶活力定為100%,則體系偏堿性時(如pH8.3),僅為全部酶活力的65%,當體系偏酸時(pH6.9),僅為全部酶活力的40%。 ATP濃度對連接酶反應影響很大,而且ATP極易分解,所以含有ATP的連接酶長時間放置后往往失效,所以一般先配成不含ATP的緩沖液(可長期保存),臨用時再加入新配置的ATP母液。
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